摘要：为提升四川省内江市各兽医实验室检测能力和水平，确保兽医实验室检测结果的科学性、准确性和一致性，2016—2020年内江市动物疫病预防控制中心连续组织开展了全市兽医系统实验室检测能力比对工作。比对项目涵盖高致病性禽流感、口蹄疫、高致病性猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟抗体检测以及非洲猪瘟病毒核酸检测。结果显示，各年度实验室比对结果平均准确率分别为100%、94.7%、100%、85.3%、96.7%；荧光聚合酶链式反应、酶联免疫吸附试验、血凝及血凝抑制试验3个检测项目比对准确率分别为100%、96.6%、91.5%。结果表明，内江市兽医系统实验室总体检测水平较高，但稳定性欠佳，实验室能力建设有待进一步加强。
农业部 2009 年印发的《兽医系统实验室考核管理办法》指出，兽医实验室是指隶属于各级兽医主管部门，并承担动物疫病诊断、监测和检测等任务的国家级区域兽医实验室、省级兽医实验室、地（市）级兽医实验室和县（市）级兽医实验室。兽医实验室是动物疫病预防控制机构不可分割的重要组成部分，既为非洲猪瘟等动物疫病防控提供科学的技术支撑，又在畜牧业健康可持续发展中起到积极推动作用，更与公共卫生安全事业息息相关。
开展兽医实验室检测能力比对工作是农业农村部加强兽医实验室管理和建设的重要举措，也是提升实验室质量管理水平和检测能力的重要技术手段。《检验检测机构资质认定能力评价检验检测机构通用要求》标准中明确指出，能力验证是根据预先制定的准则，采用检验检测机构间比对的方式，评价参加者的能力。四川省内江市本着比对分析、查漏补缺、提升完善的原则，按照农业农村部、四川省相关要求，从2010年以来持续开展县级兽医实验室比对能力验证工作。本文对2016—2020年内江市县级兽医实验室检测比对结果进行分析，以期为该市兽医实验室能力提升提供参考。
1 材料与方法
1.1 比对检测项目、方法、试剂厂家及执行标准
为避免比对样品、不同厂家、不同批次试剂盒之间存在差异，每次比对所提供的盲样和试剂厂家、批号型号、检测方法及执行标准均一致（2019年猪瘟抗体ELISA 检测试剂盒除外），具体见表 1。
1.2 比对范围
2016—2020 年，内江市连续组织辖区内 5 个县级实验室（4 个通过省级兽医实验室考核验收）开展检测能力比对工作。
1.3 比对项目设置及样品制备
每年设置 3 个比对项目。比对项目包含非洲猪瘟、口蹄疫、高致病性禽流感（禽流感）、高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟等重大动物疫病的血清学或病原学检测（表1）。比对样品由内江市动物疫病预防控制中心统一制备、测试、分装和编号，每种性状样品均有 2~3 份重复样品；每个比对项目设置 25~30 份盲样，其中 15~20 份为阳性样品，5~10 份为阴性样品；每管分装量为单次试验 4~6倍的样品量，每份盲样容量一致，性状和颜色无外观差异；从样品中随机抽取 5~6 份作为一组比对样品。试剂由内江市动物疫病预防控制中心统一订购（2019 年猪瘟抗体 ELISA 检测试剂除外）。同一样品在统一时间发放。
1.4 评判标准
1.4.1 高致病性禽流感（禽流感）抗体检测 阴、阳性对照结果成立，阳性样品检测结果值与参考值相同或与参考值存在 ±1 个滴度差异，均判为结果准确，阴性样品检测结果值应为 0。
1.4.2 O型口蹄疫、高致病性猪蓝耳病、猪瘟抗体水平检测 阴、阳性对照结果成立，阳性样品的检测结果应为“阳性”，阴性样品的检测结果应为“阴性”。
1.4.3 非洲猪瘟病毒核酸检测 阴、阳性对照结果成立，阳性样品的检测结果Ct 值应为20~25，且有特异性扩增曲线。阴性样品的检测结果应无Ct 值和特异性扩增曲线。
1.5 比对结果报送
参加检测能力比对的兽医实验室，在领取样品之日起3 d 内完成检测并报送检测结果，同时向内江市动物疫病预防控制中心出具正式检测报告书并提供检测原始记录。
2 结果与分析
2016—2020 年，内江市共开展了 15 个比对项目，其中2016—2019 年开展12 个项目（5 个县级实验室，每个项目 5 份样品），2020 年开展了 3个项目（5 个县级实验室，每个项目 6 份样品）。15 个项目共计检测 390 份样品，其中 372 份样品的检测结果准确，平均准确率为95.4%。此外，不同年份、不同检测项目、不同检测方法、不同实验室间检测结果有差异。
2.1 不同年份
2016—2020 年，内江市县级兽医实验室比对结果平均准确率分别为 100%、94.7%、100%、85.3%、96.7%（图1），呈现一定的波动性。
图1 内江市不同年度检测能力比对结果平均准确率变化趋势
2.2 不同检测方法
荧光 PCR 检测技术对动物疫病病毒核酸检测的准确率最高，近两年达 100%；ELISA 血清学方法近 5 年比对检测结果平均准确率为 96.6%，其中2016、2018 和 2020 年度均为 100%，2017 和 2019 年度分别为 96.0% 和 80.0%；HA/HI 试验 5 年来检测结果平均准确率为 91.5%，2016 和 2018 年度均为 100%，2017 年、2019 年和 2020 年度分别为92.0%、76.0%、90.0%（图2）。
图2 内江市不同年度不同检测方法准确率变化趋势
2.3 不同实验室
2.3.1 年度分布 2016 和2018 年5 个兽医实验室检测结果准确率均为100%；2017 年检测结果准确率为100% 的实验室有2 个， 准确率为 85.0%~95.0% 的实验室有3 个；2019 年检测结果准确率为85.0%~95.0% 的有4 个， 准确率低于85.0% 的实验室有 1 个；2020 年检测结果准确率为 100% 的实验室有4 个，准确率低于 85.0% 的实验室有 1 个（表2）。
2.3.2 区域分布 A 县级实验室（简称 A 区）
2016、2018 以及2020年9个项目检测结果准确率均为 100%，2017 年和 2019 年 6 个项目检测结果准确率分别为93.3%、86.7%；B 县级实验室（简称 B 区）2016—2018 年、2020年12 个项目检测结果准确率均为100%，2019年3个项目检测结果准确率为 86.7%；C 县级实验室（简称 C 县）2016年和2018年6 个项目检测结果准确率均为100%，2017 年、2019年和2020年9 个项目检测结果准确率分别为 86.7%、73.3%、83.3%；D 县级实验室（简称 D 县）2016—2018年、2020年12 个项目检测结果准确率均为100%，2019年3 个项目检测结果准确率为 93.3%；E 县级实验室（简称 E 市）2016 年、2018 年和2020年9 个检测项目准确率均为100%，2017年和2019年6 个项目检测准确率分别为 93.3%、86.7%（图3）。
图3 5 个实验室不同年度比对准确率分布
2.3.3 检测项目分布 5个县级实验室近 2 年非洲猪瘟病毒核酸荧光 PCR 检测结果准确率均为 100%；2016—2020 年，A 区—E 市 ELISA 项目检测结果准确率依次为 97.6%、95.1%、7.6%、100%、92.7%，HA/HI 项目依次为 92.3%、100%、69.0%、96.1%、100%（图 4）。
图4 5年各实验室不同检测项目准确率分布
3 讨论
从比对结果看，2016—2020 年内江市5 个县级兽医实验室共完成15 个项目390 份样品的检测，其中372 份样品的检测结果准确，平均准确率95.4%。2016 和2018年5个实验室比对准确率均为 100%，2017 年和2020 年准确率保持在 95.0%左右，2019 年准确率仅为 85.3%。由此表明，内江市兽医实验室结果准确率总体能维持在较高水准，且连续开展10 年的兽医实验室检测能力比对工作起到了较好效果。但受与实验检测活动相关的“人、机、料、法、环、测”等6 方面因素影响，少数实验室检测结果稳定性不高，还需进一步加强实验室质量管理体系建设。
从比对项目来看，近5 年所采用的血清学和病原学检测方法都是目前兽医实验室应用较为普遍且较为基础的方法。内江市县级实验室采用荧光PCR方法检测非洲猪瘟病毒核酸准确率最为稳定，两年检测结果准确率均保持在100%，PCR 方法操作简便、特异性好、灵敏度高，但在操作过程中要注意防止污染。ELISA 项目，在动物疫病免疫效果评估、感染抗体检测等中应用较多，适合大批量操作，稳定性好、可靠性高，2016—2018年、2020年均保持比较稳定的准确率，但2019 年准确率急剧下降。究其原因，此年度参加比对的实验室人员未发生变动，检测方法执行标准及仪器未变化，时间统一，环境大体一致，唯一不同的是猪瘟抗体检 测试剂盒由各县区自备。这可能是县区多采用竞争性谈判方式采购试剂（低价中标），试剂质量方面 （敏感性、特异性、稳定性、可靠性等）无法得到保证，也可能由试剂运输保存不当造成，所以试剂是影响检测结果的关键因素，应合理选择并妥善保管。HA/HI 项目虽说是血清学检测项目的一种，操作简单，但其受环境条件及个人主观因素影响较大， 操作可控性小，稳定性不高，检测过程存在随机性误差，极易导致结果出现偏差，2017年和2019年均出现了此情况，说明内江市尤其是个别实验室存在HA/HI 检测项目薄弱环节，培训指导和实际操作有待进一步加强。
内江市辖区内县级实验室检测能力比对情况总体较好，但稳定性欠佳：一是比对检测准确率检测项目之间存在差异，其中，荧光 PCR 项目比对检测准确率最为稳定，ELISA 项目比对检测准确 率次之，HA/HI 检测项目稳定性稍弱；二是县区实验室间存在差异，在比对试验环境、检测人员、仪器设备、检测试剂、检测方法及执行标准等条件均一致的情况下，B 区和 D 县检测水平较为稳定，A 县、C 县、E 市检测能力稍弱，主要是HA/HI 检测项目影响因素较多。
综上，内江各兽医实验室应通过检测能力比对分析结果，查找原因，补短板，强弱项。一是积极争取经费，进一步改进实验室硬件设施建设，加大设备投入，优化实验环境条件。二是完善实验室 质量管理体系，落实实验室各项管理制度。三是稳定实验室检测队伍，积极引进高层次人才，注重实验室人才培养和实验室工作人员的继续教育培训。四是规范实验室检测工作，完善实验室检测原始记录和检测报告。不断提升实验室检测能力和水平，更好地发挥兽医实验室在动物疫病防控和疫情风险预警预报中应有的技术支撑作用。
